Эстефан родилась в Гаване, однако в возрасте 16 месяцев родственники увезли ее в Майами, поскольку на Кубе произошла коммунистическая революция. В 1975 году вместе со своим мужем, Эмилио Эстефаном, Глория создала латиноамериканский коллектив Miami Sound Machine, в котором выступала в качестве солистки. Первоначально они исполняли песни на испанском, но постепенно переключились на английский. С 1984 г. Эстефан стала выступать с сольными концертами в США и странах Латинской Америки. В 1980-е гг. она нередко попадала на верхние позиции чартов, а три ее сингла даже сумели возглавить Billboard Hot 100.
Певица находилась на пике популярности, когда во время гастролей 20 марта 1990 г. в ее автобус врезался грузовик. Эстефан получила серьёзнейшие травмы позвоночника, от которых пыталась оправиться в течение следующего года. В 1991 г вернулась на вершины хит-парадов с автобиографической балладой «Coming Out of the Dark» (автор — Джон Секада). Вслед за этим она выпустила альбом величайших хитов. В 1994 г вышел альбом кавер-версий классических мелодий американской поп-музыки, озаглавленный Hold Me Thrill Me Kiss Me. Два года спустя Эстефан была приглашена выступить на церемонии закрытия Олимпийских игр в Атланте.
В сентябре 2011 года певица выпустила новый альбом "Мисс Маленькая Гавана" (англ. Miss Little Havana).
