Північно Очоа: биография

Влітку 1954 року Північно став деканом біохімічного Факультету і переїхав у нове будівлю через дорогу. Там було більше місця, в підвалі була досвідчена установка, керована Мортоном Шнайдером і Пітером Лозино; також там було зручніше працювати з радіоактивними ізотопами. З групи пішли Сеймур Кауфман, Джо Штерн і Еліс дель Кампільо, а Білл Якобі, Мартін Флавін і Чарльз Гілвард залишилися; новими співробітниками були Гегард Плаут і Енріко Кутоло. Тут у нас було більше зручностей для ланчу, а також нас відвідувало більшу кількість людей. Настав ще більш діяльну і бадьорий час. Але, після першого захоплення від відкриття нової реакції я провела кілька розчаровують надії місяців, намагаючись домогтися хоч якогось прогресу. Протягом цього часу Північно від усієї душі надавав мені підтримку і схвалював мене в спробах додатково очистити фермент. Я проробила це, але все одно не могла визначити реакцію: це було, як якщо у вас є білковий кристал, але ви не можете впізнати сам кристалізується білок. Під час обміну виділялося трохи фосфату, але це пропонувалося залишкам забруднення фосфатазою. Північно починав впадати в зневіру з-за того, що в цей час Пінчот виділив різні фракції з Alcaligenes faecalis, які, змішуючись, каталізували поглинання чистих фосфатних груп, супроводжуване електронним переносом. Він став сумніватися у значенні обміну і схвалив мою спробу відтворити експеримент Пінчот з екстрактом Azotobacter vinelandi. Я згадала, що Пінчот відвідував нас і виробляв експерименти в нашій лабораторії. Однак я не була готова до негайного вирішення завдання. Особливо, я була в глухий кут через невеликого виділення фосфату, у той час як точно знала, що фермент добре очищений від фосфатази, і вирішила вистежити причину цього явища.

У цей час Північно відправився до Європи ( думаю, у справах, пов'язаним з Міжнародним біохімічним союзом). Я пообіцяла йому, що, якщо у мене не буде результатів до його повернення, я знову почну шукати незначне виділення PO4 в екстрактах Azotobacter vinelandi. Я провела простий експеримент, який став вирішальним у відкритті полінуклеотідфосфорілази: замінила ADP інозіндіфосфатом (IDP). Аденілаткіназа неактивна по відношенню до похідних інозину, і, таким чином, я уникнула складнощів з моно-і тріпроізводнимі, утвореними аденілаткіназой, і побудувала криву насиченості. Дифосфати були важкодоступними і дорогими речовинами і я повинна була виправдати використання такої кількості їх для експерименту, що здавався тривіальним. Однак, в стані насичення (у полінуклеотідфосфорілази низьку спорідненість до діфосфатним похідним) я виявила значне виділення фосфатних груп. Було розрадою зрозуміти, що я маю справу не тільки з реакцією обміну, але і з реакцією, в ході якого утворюється PO4. Я тут же стала хроматографічно ідентифікувати інший продукт реакції. З цього боку, реакція гідролізу дифосфату в монофосфат до цих пір представляє інтерес. У той же самий час, на факультеті працював Гегард Плаут, який вивчав IDP-азу, яку виділяв з мітохондрій щурячій печінки, однак реакція в моєму випадку виглядала оборотної, а оборотність гідролітичних реакцій здавалася неправдоподібною. Хроматографія реакційної суміші на Дауексовой колоні показала освіта IMP, що порадувало мене, але, спочатку, я не могла ідентифікувати будь-які нові продукти в елюате з колони. Виходячи з цього, синтезується фермент, можливо, був з'єднанням, не елюіровавшемся в умовах цього експерименту. Я почала сподіваються, до кінця в це не вірячи, що продукт, що засів в колоні, міг бути високомолекулярним з'єднанням. На щастя, використовуючи хроматографічну папір, я змогла ідентифікувати свіжу пляму ультрафіолету в реакційній суміші після ферментативної інкубації, що виходить не з початку хроматограми і зрозуміла, що утворився фермент - полинуклеотид. Ніколи я не забуду той день, коли побачите нове пляма - мене настільки переполняля емоції, що хотілося розповісти про подію всім, хто був у лабораторії, але, на мою розчарування, як і у випадку з Північно С конденсується ферментом, там нікого не виявилося - був якийсь свято. Нарешті, я зателефонувала Північно додому, він був здивований тим, що трапилося. Він був, звичайно ж, задоволений відкриттям, але, в глибині душі, все ще сподівався, що синтезований продукт має пірофосфатная зв'язок і якось пов'язаний з окислювальним фосфорилюванням. Це добре ілюструє те, як далекі від молекулярної біології були інтереси тодішніх ензимології. Ензимологія нуклеїнових кислот вивчалася тоді в інших місцях невеликими групами, частіше всього, англійськими (Маркем, Пірі, Калькари). Не думаю, що в перший рік роботи в Нью-Йорку чула хоч раз слова «нуклеїнова кислота». Але незабаром, ми були шоковані відкриттям. Північно розповів мені, що, проводячи в Бесезде семінар по P-ферменту, в кінці він коротко упомінул про відкриття (ми ще не зрозуміли структуру полімеру) і убідел, як сонний весь семінар Калькари раптом, прокинувшись, підскочив на стільці!