Північно Очоа: биография

Було також кілька повідомлень про те, що окиснення пропіонату включає в себе фіксацію CO2 і веде до утворення сукцинату. Північно просить Мартіна Флавіна, який приєднався до групи, дослідити цей процес. Флавін, використовуючи екстракт свинячого серця, виявив, що даний екстракт переводить пропіонат в дикарбонову кислоту, але кислота ця не сукціновая, а метілмалонат. Робота М. Флавіна, Й. Казір, Е. Леоне, П. Ленгіела, Р. Мацундера та інших показує, що пропіонат спершу переходить в пропіоніл CoA карбоксилазою - фермент, що містить біотин; потім метілмалоніл CoA ізомеризується до A і B-форм. По-форма дає сукцініл CoA з метілмалонілмутази; мутаза - фермент В12. Пропіоніл CoA карбоксилазою, викристалізована Казір, карбоксилуєтся і переносить карбоксильну групу пропіонілу CoA.

Цікавий фермент циклу трикарбонових кислот, відкритий Кауфманом в шпинаті, каталізує синтез ATF з ADF, Pi та сукциніт CoA. Сукцініл CoA був потім деацетілірован в сукцинат і CoA. Фермент був позначений як фосфорилируют фермент або P-фермент, а потім сукцініктіокеназа. P-фермент бере участь у субстраном фосфорилюванні, наступного за декарбоксилювання кетоглютарата в циклі Кребса. Цей фермент переконав Північно повернутися до вивчення окисного фосфорилювання.

Полінуклеотідфосфорілаза

У 1955 році він разом з аспіранткою Маріанною Грюнберг-Манаго (уродженкою Росії, згодом відомим біохіміком, працював-ший у Франції) виділив з мікроорганізму Azotobacter vinelandi новий фермент, який каталізував синтез in vitro подібної з РНК молекули, що складається з 4, 3, 2 і навіть одного азотистого підстави. Ферменту було дано назву «полінуклеотідфосфорілаза». Ретельні експерименти показали, що синтетичний полирибонуклеотидов нагадує собою натуральну РНК за розміром. Його молекулярна маса варіювала від 30000 до 1-2 х 106 Так. Були схожі і константи седиментації. Для проведення надійної реакції синтезу РНК потрібний високоочищений фермент, для чого використовували хроматографію. Крім того, для ініціації синтезу необхідно було додавання в розчин невеликої кількості олігомеру - тоді відбувається нарощування полімерного ланцюга. При обробці синтезованого РНК-подібного полімеру панкреатичної рибонуклеази виходить суміш олігонуклеотидів така ж, як і при розщепленні натуральної РНК в подібних умовах. У дослідах з гідролізом синтезованого полімеру за допомогою фосфодіестерази, виділеної з зміїної отрути і тканини селезінки, було показано, що отримана експериментально РНК являє собою лінійну ланцюжок, нуклеозидні одиниці якої пов'язані 3,5 '-фосфодіефірних містками. Через два роки Артур Корнберг виділив з кишкової палички фермент ДНК-полімеразу і з його допомогою здійснив синтез ДНК. У 1959 р. обом ученим була вручена Нобелівська премія.

Генетичний код

Після відкриття полінуклеотідфосфорілази, в лабораторії Північно займалися, головним чином, двома речами: окисленням пропіонату, що вивчалися докторами, які прийшли після відходу Мартіна Флавіна, і, власне, самої полінуклеотідфосфорілазой. Північно працював з новим вченим з Японії - Сана Мі - над реакцією синтезу, сподіваючись, що з подальшим очищенням ферменту з'ясуються праймер або матричні обмеження. Фактично, це був єдиний випадок, коли протеолізірующійся фермент потребував праймері для синтезу полімеру. Не дивлячись те, що надалі ці дослідження не виявилися корисними у визначенні ролі ферменту in vivo, вони принесли надзвичайно велику користь у синтезі багатьох полімерів. Таким чином, лабораторія Очоа була готова до експерименту in vitro над генетичним кодом.